反相高效液相色谱法测定己酮可可碱氯化钠注射液中的有关物质

作者：信息来源:电子市场 2007-5-31

字体大小:小 中 大网友评论条 进入论坛

摘要：用RP－HPLC建立了己酮可可碱氯化钠注射液中有关物质的检测和控制方法。以Spherisorb C18柱和甲醇－0．1％冰醋酸（50∶50，1 mL／min），得到己酮可可碱及其有关物质基线分离，用UV检测器（波长264 nm）的最低检测量为4 ng，控制总杂质量不得过1．0％。有关物质。中国药典2000年版已收载己酮可可碱及其制剂，但对其有关...

摘　要：用RP－HPLC建立了己酮可可碱氯化钠注射液中有关物质的检测和控制方法。以Spherisorb C₁₈柱和甲醇－0．1％冰醋酸（50∶50，1 mL／min），得到己酮可可碱及其有关物质基线分离，用UV检测器（波

264 nm）的最低检测量为4 ng，控制总杂质量不得过1．0％。该法简便、快速、准确，适用于己酮可可碱及其制剂的质量控制。
关键词：己酮可可碱；己酮可可碱氯化钠注射液；有关物质；反相高效液相色谱法

　　己酮可可碱为血流改善剂，通过改善红细胞的变形能力，降低血液黏度，抑制血小板和红细胞的过度聚集，能扩张血管，降低血管阻力，从而改善血流特性，增加微循环，改善脑和周围血管的血流分布，适用于缺血性脑血管疾患，周围血管血流障碍疾病，内耳功能障碍疾病（如老年性血管性耳聋，耳鸣），糖尿病性视网膜动脉血流障碍等。中药典2000年版已收载己酮可可碱及其制剂，但对其有关物质未作规定。本文经过对多种色谱条件的优选，采用反相高效液相色谱法，可以快速、准确地对己酮可可碱氯化钠注射液中的有关物质进行测定。
1　实验部分
1．1　仪器与试剂
　　Shimadzu LC－10Avp高效液相色谱仪系统，紫外－可见检测器，N－2000色谱工作站（浙江大学），TU－1800紫外－可见分光光度计（北京普析通用仪器有限责任公司）。
　　甲醇（色谱纯，上海陆都化学试剂厂），醋酸（AR），水为双蒸水；己酮可可碱对照品（含量99．87％，HPLC归一化法）、己酮可可碱氯化钠注射液（江苏省东台市康怡制药有限公司）。
　　考虑到检测样品为注射剂，采用流动相直接稀释配制，可减少多过程制样带来的分析误差。故取试样适量用流动相制成约含己酮可可碱0．2 mg／mL的溶液作为供试品溶液。以标样用流动相制成约含己酮可可碱0．2 mg／mL的溶液，作为对照品溶液；另取该对照品溶液1．0 mL，加流动相稀释至100 mL，作为自身对照液（2μg／mL）。
1．2　色谱条件
　　色谱柱：Spherisorb C18（4．6 mm×250 mm，10μm），流动相：甲醇－0．1％醋酸（50∶50），流速：1 mL／min，检测波长：264 nm，柱温：室温，灵敏度：0．05 AUFS，进样量：20μL，理论塔板数按己酮可可碱峰计算应不低于3 000。
2　结果讨论
2．1　色谱条件的选择
2．1．1　流动相　文献［1］采用ODS柱，甲醇－水－冰醋酸（45∶55∶5）为流动相，274 nm为检测波长，对己酮可可碱原料中有关物质进行检测；文献［2，3］采用ODS柱，22．5％乙腈为流动相，280 nm为检测波长，对血浆中己酮可可碱含量进行检测。笔者发现文献［1］所用的流动相对己酮可可碱不合适，样品用流动相配成溶液后很不稳定，且冰醋酸浓度过大，样品容易分解。
2．1．2　pH值与甲醇浓度　当以甲醇－水为流动相，甲醇－水比例分别为7∶3、6∶4和5∶5时，色谱图拖尾较明显，虽然在甲醇含量较高时，柱效较高，但出峰太快，主峰前的杂质峰易被掩盖；当以甲醇－磷酸盐缓冲液（pH＝7．5）为流动相，甲醇－磷酸盐缓冲液（pH＝7．5）比例分别为55∶45、50∶50和45∶55时，色谱峰拖尾，且柱效较低；当甲醇－0．1％冰醋酸为流动相时且比例为55∶45、50∶50和45∶55时，所得色谱峰峰形较好，柱效较高，其中以甲醇含量为50％时柱效最高，故选择甲醇－0．1％冰醋酸（50∶50）为流动相。
2．1．3　检测波长　经对己酮可可碱对照品溶液进行紫外扫描（200～400 nm）发现274 nm是己酮可可碱的最大吸收波长（λmax），但其杂质不一定在此波长有最大吸收，为使己酮可可碱和杂质均有较大吸收，且多数杂质能有响应，分别测定了不同波长条件下己酮可可碱和杂质的响应情况，结果显示：随着检测波长的紫移，主峰峰面积下降明显，而杂质总面积变化不大，当以264 nm作为检测波长时，可检测到两个杂质峰，样品和杂质均有较大吸收且分离良好（R＞1．5），故选择264 nm作为检测波长。
2．3　方法试验
　　本文通过专属性、灵敏度、稳定性和重复性等试验，表明本法具有快速、准确、灵敏度高和选择性好等优点，可用于己酮可可碱氯化钠注射液中有关物质检查。
2．3．1　方法专一性　取流动相、空白注射液（0．9％氯化钠）、自身对照液和对照品溶液分别进样。结果表明：空白注射液不干扰己酮可可碱有关物质的检测，主峰tR在6 min左右，9 min后已无杂质峰。
2．3．2　方法灵敏度　取己酮可可碱对照品溶液适量，用流动相稀释成约含己酮可可碱2μg／mL（1．0％）、1μg／mL（0．5％）、0．5μg／mL（0．25％）和0．2μg／mL（0．1％）的溶液，各取20μL进样测定，记录色谱图，结果己酮可可碱的最小检测限为4 ng（S·N－1＝2）。
2．3．3　重复性试验　取上述供试品溶液，重复进样5次，结果己酮可可碱平均峰面积为4 225 348±559．3，RSD＝0．13％；另同时制备5份供试品溶液，分别进样测定，结果己酮可可碱平均峰面积为471 345．7±4 618．5，RSD＝0．98％。
2．3．4　稳定性试验　取供试品溶液，分别于制备后的0，5，10，24和48 h时进样测定，记录色谱图，结果显示：本品在流动相中48 h内保持稳定。
2．4　己酮可可碱氯化钠注射液中有关物质测定

　　取本品1．0 mL，用流动相稀释至5．0 mL，摇匀，作为供试品溶液，另取此液1．0 mL，用流动相稀释至100mL，作为对照液；取对照液20μL进样，记录色谱图，调节仪器检测灵敏度，使主成份峰高约为记录仪满量程的10％～20％，再准确量取上述两种溶液各20μL，注入液相色谱仪，记录色谱图至主成分峰保留时间的2倍，供试品溶液若显杂质峰，量取杂质峰总面积，与对照液主成分峰峰面积比较，不得超过对照液主成分峰峰面积（1．0％），其中最大杂质峰峰面积不得超过对照液主成分峰峰面积的一半（0．5％），结果见表1和图1。

考文献：

［1］　李素哲．己酮可可碱中杂质的RP－HPLC检测［J］．中国医药工业杂志，1996，17（1）：509－510．
［2］　邓艳萍，刘华屏，李宝芬，等．血浆中己酮可可碱的检测方法及其在药代动力学中的应用［J］．中国临床药理学杂志，1995，11（2）：107－110．
［3］　刘华屏，李宝芬，邓艳萍，等．中国健康志愿者口服多剂量己酮可可碱普通肠溶片的稳态浓度［J］．1995，11（3）：152－155．

分页：